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ATCC細胞培養常出現的技術問題解答

發布時間: 2021-12-07  點擊次數: 168次
   ATCC細胞的培養是指在體外模擬體內環境(無菌、適宜溫度、酸堿度和一定營養條件等),使之生存、生長、繁殖并維持主要結構和功能的一種方法,也叫細胞克隆技術,在生物學中的正規名詞為細胞培養技術。
  對于ATCC細胞的培養常出現的技術問題我們如何找出答案?
  1.培養用液pH對細胞生長有何影響?
  由于大多數細胞適宜pH為7.2-7.4,偏離此范圍對細胞將產生有害的影響。各種細胞對pH的要求也不完全相同,原代培養細胞一般對pH變動耐受差,無限細胞系耐受力強??傮w來說,細胞耐酸性比耐堿性強一些,偏酸環境中更利于細胞生長。因此在配制培養用液時,可把液體的pH稍微調得偏酸一些。液體在經過0.10um或0.22um濾膜過濾時,溶液的pH還會向上浮動0.2左右。
  2.何為傳代培養?
  在進行傳代時,如果是懸浮細胞,只需簡單稀釋即可,若需完全更換培養液只需低速離心沉淀,再懸浮于合適的培養液中即可。一般細胞每毫升接種數量為5´104-8´105個,傳代密度太低,細胞容易死亡,表現出細胞在達到增長前有較長的滯留期。在培養過程中,培養液會由于pH下降而呈現黃色,表明細胞已經達到最大密度需要換液或進行傳代培養。如果是單層貼壁的細胞,等長滿培養瓶表面,即可進行傳代,多數細胞需用胰蛋白酶處理將細胞從生長物表面分離下來,以促進傳代培養。
  3.細胞培養的環境有何要求?
 ?、贌o污染環境
  培養環境無毒和無菌是保證細胞生存的首要條件。當細胞放置于體外培養時,與體內相比細胞丟失了對微生物和有毒物的防御能力,一旦被污染或自身代謝物質積累等,可導致細胞死亡。因此在進行培養中,保持細胞生存環境無污染、代謝物及時清除等,是維持細胞生存的基本條件。
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  維持培養細胞旺盛生長,必須有恒定適宜的溫度。人體細胞培養的標準溫度為36.5±0.5℃,偏離這一溫度范圍,細胞的正常代謝會受到影響,甚至死亡。培養細胞對低溫的耐受力較對高溫強,溫度上升不超過39℃時,細胞代謝與溫度成正比;人體細胞在39-40℃1小時,即能受到一定損傷,但仍有可能恢復;在40-41℃1小時,細胞會普遍受到損傷,僅小半數有可能恢復;41-42℃1小時,細胞受到嚴重損傷,大部分細胞死亡,個別細胞仍有恢復可能;當溫度在43℃以上1小時,細胞全部死亡。
 ?、蹥怏w環境
  氣體是人體細胞培養生存必需條件之一,所需氣體主要有氧氣和二氧化碳。氧氣參與三羧酸循環,產生供給細胞生長增殖的能量和合成細胞生長所需用的各種成分。開放培養時一般把細胞置于95%空氣加5%二氧化碳混合氣體環境中。

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